分享金黄色葡萄球菌的分离及鉴定
来源:    发布时间: 2018-02-09 09:41   35 次浏览   大小:  16px  14px  12px
依据 GB4789.10-

依据 GB4789.10-2010 第一法和第三法分别对食品样品进行金葡菌定性和定量分析(略作修改) 。采用金葡菌显色培养基平板代替Baird-Parker平板进行选择性分离,挑取金葡菌疑似单菌落进行血浆凝固酶实验和API Staph生化鉴定。
抗生素的药敏实验采用K-B纸片扩散法,将麦氏浊度为0.5的菌液均匀涂布于MH琼脂平板上,(35±2) °C 培养24 h。药敏纸片根据2015 美国临床和实验室标准协会(Clinical and Laboratory Standards Institute,CLSI)的指导方针,选取目前临床上常用于治疗金葡菌感染的10大类及其他治疗候选抗生素共24 种对分离株进行药敏分析,其中对头孢西丁耐药,则认为是MRSA菌株,对三类及以上抗生素耐药为多重耐药性。另外,万古霉素依据CLSI 标准采用最小抑菌浓度法(Minimum inhibitory concentrations,MICs)进行检测。
采用细菌基因组DNA抽提试剂盒提取金葡菌基因组DNA,应用Bio Spec-nano spectrophotometer紫外分光光度计检测其浓度和纯度,置于–20°C冰箱保存待用。通过PCR法检测mecA基因的存在情况,对确证的MRSA菌株进行SCCmec分型,反应条件为94°C预变性5min,94°C 变性45 s, 65 °C 退火45 s,72 °C 延伸1.5 min,10个循环;94 °C 变性 45 s,55 °C 退火 45 s,72 °C 延伸 1.5 min,25 个循环,72 °C 延伸10min;于4 °C保存。
对金葡菌检测的7个管家基因(arcC、aroE、glpF、gmk、 pta、tpi 和 yqiL)进行扩增测序,每个管家基因获得对应的位点,每株菌的7个位点组合获得一个ST 型别。然后通过eBURST (http://eburst.mlst.net) 对分离株进行亲缘关系分析,获得各ST型对应的克隆复合体。

5-Phenylhydantoin    89-24-7     100mg    5-苯基海因标准品
8-Bromotheophylline    10381-75-6    400mg    8-溴茶碱标准品
Abacavir Stereoisomers Mixture        15mg    阿巴卡韦系统适应性混合物标准品
Abacavir Sulfate Racemic    188062-50-2    20mg    外消旋阿巴卡韦标准品
Acebutolol Hydrochloride    34381-68-5    125mg    盐酸醋丁洛尔标准品
Acenocoumarol    152-72-7    200mg    醋硝香豆素标准品
Acepromazine Maleate    3598-37-6    250mg    乙酰丙嗪马来酸盐标准品
Acesulfame Potassium    55589-62-3    200mg    安赛蜜标准品
Acetaminophen    103-90-2    400mg    对乙酰氨基酚标准品
Acetazolamide    59-66-5    2g    乙酰唑胺标准品