各菌株划线
来源:    发布时间: 2018-02-05 10:02   29 次浏览   大小:  16px  14px  12px
各菌株分别

各菌株分别划线培养于 LB 琼脂平板,将药敏纸片均匀贴于表面。37 °C 培养 18 h 后,测量各药敏纸片的抑菌圈直径,以 mm 计,参照 CLSI 标准,判定被检细菌对每种药物的敏感性,分别为敏感(Susceptible,S)、中(Intermediate,I) 或耐药(Resistance,R)菌株。

将 APECO1、APECO1ΔluxS、DE17、DE17ΔluxS、 E940和E940ΔluxS分别接种于LB琼脂平板,37 °C 培养过夜,挑取单菌落接种试管中,培养至对数中期,调整 OD600=1.0,按 1∶100 稀释接种于 LB 培养基中,37 °C、200 r/min 振荡培养至平台期,间隔等量时间取样测量 OD600 值,记录并整理数值,绘制菌株的生长曲线。

将上述6株菌于37°C培养至OD600为2.0,用新配制的AB培养基以1∶5000 稀释培养物。将上述超滤液在无菌条件下用0.22μm的滤器过滤后,用于AI-2活性检测。参照文献并做适当修改,具体方法如下:900 μL的AB培养基,加入上述无菌的各滤液 100 μL,37 °C 培养 5 h 后,用多功能酶标仪的生物发光模式测定其生物发光。同时以哈维弧菌 BB152 培养上清为阳性对照, AB培养基为阴性对照,每组重复 3 次。
细菌生物被膜形成实验根据文献方法并做适当改进:将上述6株菌分别接种LB琼脂平板, 37 °C 培养后,挑取单菌落接种试管中振荡培养至对数中期,4 °C、3000g 离心10min收集菌体。以M9洗2遍,再以 M9+0.2%葡萄糖重悬菌体,调整OD600=0.03,加入到96 孔聚丙烯板中,每孔200 μL,以无菌培养基作为对照组,每组6 个重复,各重复3次。37 °C培养24 h,每孔加入200 μLPBS洗涤3遍,晾干后每孔加入200 μL0.1%结晶紫溶液,37°C染色15min,PBS洗涤3遍,晾干。每孔加入 200 μL 95%乙醇,充分溶解后,酶标仪测定每孔样本 OD595 的数值,并通过 GraphPad Prism 6 paired t 检验分析数据。
将上述6株菌分别接种LB琼脂平板,挑取单菌落接种试管中振荡培养至对数中期,4 °C3000g 离心10min收集菌体,以无菌PBS洗涤2遍调至OD600=3,配制新鲜的 rdar 培养基(刚果红0.008 g,考马斯亮蓝0.004 g,蛋白胨2.000 g,酵母粉1.000 g,琼脂粉1.600 g),高压灭菌后的rdar固体培养基中滴加0.5μL菌体,37 °C 培养24 h后,拍照记录。
将上述6株菌分别接种LB琼脂平板,挑取单菌落于玻璃试管静置培养至对数中期,4 °C、 3000g 离心10min收集菌体,以无菌PBS洗涤2遍调至OD600=3,配制新鲜的运动性培养基(2.0 g 蛋白胨,1.0 g 氯化钠,1.6 g 葡萄糖,0.5 g 琼脂粉),高压灭菌后倒入平板,待冷却后在板的中央加入 2 μL 菌体,37 °C 培养 24 h。然后测量拍照。

HPLC≥98%    异绿原酸B(3,4-二咖啡酰奎宁酸)    20mg/支    Isochlorogenic acid B    
HPLC≥98%    异绿原酸C(4,5-二咖啡酰奎宁酸)    20mg/支    Isochlorogenic acid C    
HPLC≥98%    1-咖啡酰奎宁酸    20mg/支    1-caffeoylquinic acid    
HPLC≥98%    洋蓟素(1,3-二咖啡酰奎宁酸)    20mg/支    Cynarin    
HPLC≥98%    1,5-二咖啡酰奎宁酸    20mg/支    1,5-Dicaffeoylquinic acid    
HPLC≥98%    巴马汀(黄藤素,棕榈碱)    20mg/支    Palmatine    
HPLC≥98%    橙皮苷    20mg/支    Hesperidin    
HPLC≥98%    新橙皮苷    20mg/支    Neohesperidin    
HPLC≥98%    柴胡皂苷B    20mg/支    SaikosaponinB